Metodología
Cómo evalúa Clonar la resistencia a enfermedades
Un resultado de fenotipado tiene que ser reproducible. Cada ensayo reproduce las tres condiciones de la enfermedad, controla las fuentes de variación y registra los procedimientos, desde el aislado utilizado hasta la temperatura del invernadero.
Triángulo de la enfermedad
Condiciones necesarias para que ocurra la enfermedad en el ensayo
El análisis de resistencia exige que las tres condiciones para que ocurra la enfermedad estén presentes al mismo tiempo: planta sana, patógeno agresivo y ambiente favorable. Si falta una de ellas, el ensayo no diferencia los clones.
- Hospedero sano: plantas estandarizadas en edad, tamaño y sanidad, para que las diferencias observadas se deban al genotipo.
- Patógeno agresivo: aislados del banco con patogenicidad confirmada y agresividad conocida.
- Ambiente favorable: temperatura, humedad y período de mojado foliar ajustados a cada patógeno.
Las etapas
Seis etapas y el control de cada una
La secuencia de etapas es la misma para todas las enfermedades; el protocolo de cada etapa varía según el patógeno.
Elección de los aislados
Selección por origen, hospedero y agresividad registrada en el banco. Para clones destinados a varias regiones, se usa más de un aislado.
Control: código del aislado registrado en el informeEstandarización de las plantas
Plantas sanas, de la misma edad y tamaño, aclimatadas antes de la inoculación.
Control: descarte de plantas fuera del estándarAleatorización y repeticiones
Clones y testigos sorteados en los bloques, para que las diferencias de luz y humedad del invernadero no se confundan con la genética.
Control: mapa del ensayo archivadoInóculo preparado y cuantificado
Método adecuado a cada patógeno (en el leño, en el suelo o en el follaje), con la concentración del inóculo verificada el mismo día.
Control: lote y concentración del inóculoAmbiente favorable a la infección
Temperatura, humedad y período de mojado foliar ajustados al patógeno, registrados a lo largo del ensayo.
Control: registro continuo del ambienteMedición, análisis e informe
Escalas estandarizadas y mediciones directas, evaluadores entrenados, análisis estadístico y clasificación de cada clon.
Control: los testigos validan el ensayoDiseño experimental
Aleatorización de la posición de las plantas en los bloques
Dentro de un invernadero, la luz, la temperatura y la humedad varían de una mesada a otra. Si un clon ocupara siempre la posición más húmeda, el efecto del ambiente se confundiría con el efecto del genotipo.
- Bloques: cada bloque contiene todos los clones del ensayo, una vez.
- Sorteo: la posición de cada clon dentro del bloque se aleatoriza.
- Testigos: un clon de resistencia conocida y uno susceptible en todos los bloques. Si el testigo susceptible no presenta síntomas, el ensayo se invalida y se repite.
Ilustración del principio, con 6 clones y 4 bloques. El número de clones, bloques y plantas por parcela se define en cada propuesta.
Escala de evaluación · ejemplo de la roya
Escala de notas para la roya del eucalipto
Para las enfermedades foliares, usamos escalas de notas con una descripción objetiva de cada clase, reproducibles entre evaluadores entrenados. Seleccione una nota para ver el síntoma y la clasificación.
Escala ilustrativa de 0 a 4 para la roya del eucalipto (Austropuccinia psidii), adaptada de Junghans et al. (2003), Theoretical and Applied Genetics.
De la medición a la clasificación
Criterios de clasificación de los clones
1. Medición
Según la enfermedad: longitud de lesión en el leño, porcentaje de área foliar afectada, incidencia de marchitez o nota de escala.
2. Análisis estadístico
Medias por clon, variabilidad entre repeticiones y comparación con los testigos del propio ensayo.
3. Clasificación
Cada clon se clasifica como resistente, tolerante o susceptible en relación con los testigos, con la recomendación para el programa.
Reproducibilidad
Lo que queda registrado en todos los ensayos
Registros que permiten repetir el ensayo, en el mismo laboratorio o en otro, y comparar los resultados.
- Código, origen e historial de cada aislado utilizado
- Lote y concentración del inóculo el día de la inoculación
- Mapa del ensayo con la posición sorteada de cada planta
- Temperatura y humedad a lo largo de la incubación
- Fechas de evaluación, evaluadores y fotos por clon
Próximo paso
Discusión del protocolo antes de la contratación
El equipo técnico presenta el diseño del ensayo al equipo de mejoramiento del cliente y ajusta el protocolo al objetivo del programa.
o escriba a comercialclonar@gmail.com