Metodologia
Como a Clonar avalia a resistência a doenças
Um resultado de fenotipagem precisa ser reprodutível. Cada ensaio reproduz as três condições da doença, controla as fontes de variação e registra os procedimentos, do isolado utilizado à temperatura da casa de vegetação.
Triângulo da doença
Condições necessárias para a ocorrência da doença no ensaio
A análise de resistência exige que as três condições para a ocorrência da doença estejam presentes ao mesmo tempo: planta sadia, patógeno agressivo e ambiente favorável. Sem uma delas, o ensaio não diferencia os clones.
- Hospedeiro sadio: mudas padronizadas em idade, porte e sanidade, para que as diferenças observadas se devam ao genótipo.
- Patógeno agressivo: isolados do banco com patogenicidade confirmada e agressividade conhecida.
- Ambiente favorável: temperatura, umidade e período de molhamento ajustados a cada patógeno.
As etapas
Seis etapas e o controle de cada uma
A sequência de etapas é a mesma para todas as doenças; o protocolo de cada etapa varia conforme o patógeno.
Escolha dos isolados
Seleção por origem, hospedeiro e agressividade registrada no banco. Para clones destinados a várias regiões, usa-se mais de um isolado.
Controle: código do isolado registrado no laudoPadronização das mudas
Mudas sadias, de mesma idade e porte, aclimatadas antes da inoculação.
Controle: descarte de plantas fora do padrãoCasualização e repetições
Clones e testemunhas sorteados nos blocos, para que diferenças de luz e umidade da casa de vegetação não se confundam com genética.
Controle: mapa do ensaio arquivadoInóculo preparado e quantificado
Método adequado a cada patógeno (no lenho, no solo ou na folhagem), com concentração do inóculo aferida no dia.
Controle: lote e concentração do inóculoAmbiente favorável à infecção
Temperatura, umidade e período de molhamento ajustados ao patógeno, registrados ao longo do ensaio.
Controle: registro contínuo do ambienteMedida, análise e laudo
Escalas padronizadas e medidas diretas, avaliadores treinados, análise estatística e classificação de cada clone.
Controle: testemunhas validam o ensaioDelineamento
Casualização da posição das plantas nos blocos
Dentro de uma casa de vegetação, luz, temperatura e umidade variam de uma bancada para outra. Se um clone ocupasse sempre a posição mais úmida, o efeito do ambiente se confundiria com o efeito do genótipo.
- Blocos: cada bloco contém todos os clones do ensaio, uma vez.
- Sorteio: a posição de cada clone dentro do bloco é casualizada.
- Testemunhas: um clone sabidamente resistente e um suscetível em todos os blocos. Se a testemunha suscetível não apresenta sintomas, o ensaio é invalidado e repetido.
Ilustração do princípio, com 6 clones e 4 blocos. O número de clones, blocos e plantas por parcela é definido em cada proposta.
Escala de avaliação · exemplo da ferrugem
Escala de notas para a ferrugem do eucalipto
Para doenças foliares, usamos escalas de notas com descrição objetiva de cada classe, reprodutíveis entre avaliadores treinados. Selecione uma nota para ver o sintoma e a classificação.
Escala ilustrativa de 0 a 4 para ferrugem do eucalipto (Austropuccinia psidii), adaptada de Junghans et al. (2003), Theoretical and Applied Genetics.
Da medida à classificação
Critérios de classificação dos clones
1. Medida
Conforme a doença: comprimento de lesão no lenho, porcentagem de área foliar afetada, incidência de murcha ou nota de escala.
2. Análise estatística
Médias por clone, variabilidade entre repetições e comparação com as testemunhas do próprio ensaio.
3. Classificação
Cada clone é classificado como resistente, tolerante ou suscetível em relação às testemunhas, com a recomendação para o programa.
Reprodutibilidade
O que fica registrado em todo ensaio
Registros que permitem repetir o ensaio, no mesmo laboratório ou em outro, e comparar os resultados.
- Código, origem e histórico de cada isolado usado
- Lote e concentração do inóculo no dia da inoculação
- Mapa do ensaio com a posição sorteada de cada planta
- Temperatura e umidade ao longo da incubação
- Datas de avaliação, avaliadores e fotos por clone
Próximo passo
Discussão do protocolo antes da contratação
A equipe técnica apresenta o desenho do ensaio à equipe de melhoramento do cliente e ajusta o protocolo ao objetivo do programa.
ou escreva para comercialclonar@gmail.com